实验仪器SOP
及注意事项
泰山医学院病原生物研究所
生物安全二级实验室（BSL-2）
2015.10
目录
1. 高速离心机························1
2. 高压蒸汽灭菌锅····················2
3. 超低温冰箱···············
4. 超纯水仪
5. 变性梯度凝胶电泳系统
6. 荧光定量PCR仪
7. 生物安全柜
8. CO2培养箱
9. 倒置显微镜
10. 低温高速离心机
11.
1. 高速离心机
型号：PICO 21
产地：美国
成产厂家：Thermo科技公司
价格：
购置日期：
离心机使用说明及注意事项
一、操作步骤：
1、离心机必须放置于水平面；
2、插好电源，打开开关（开关位于机体后方）；
3、按OPEN键打开机盖，取下转子保护卡板，将离心管对称放入转孔，扣紧卡板；
4、机盖关闭，调节所需参数：
1）选择转速“XG”或“RPM”，灯亮即为选中；
2）选择“SPEED”调整转速：转速范围为300~14800（显示0.3~14.8）RPM或100~21100(显示0.1~21.1)XG；
3）选择“TIME”调整离心时间；
5、参数调整结束后，按下“START”键启动，设定时间结束后离心自动停止；若中间需停止，按下“STOP”键，离心停止；
6、“PLUSE”键：瞬时离心，长按此键离心速度逐渐加快，松开后离心结束；
7、关闭电源。
二、注意事项：
1、离心结束后整理好所用物品，将离心机内胆、转孔等擦拭干净，防止样品溢出损伤仪器；
2、样品必须严格配平后对称离心，若离心机开始即出现“咔、咔”等声音，表明未配平或保护卡板未拧好，此时应立即按“STOP”键停止离心。
3、按规定操作并做好使用记录，如有问题请及时向管理人员提出或及时补救。
2. 高压蒸汽灭菌锅
型号：MLS-3751L
产地：日本
成产厂家：Panasonic公司
价格：
购置日期：
高压蒸汽灭菌锅使用说明及注意事项
一、操作步骤：
1、设置排气箱：
1）取出排气箱，拆下密封垫圈；
2）将去离子水注入到“底”位（最低水位），将密封垫圈插入排气箱的插孔中后连接排气软管；
3）检查确认排气软管的密封垫圈是否插入排气箱的插孔中；
4）将排气箱安装在本产品中；
2、打开电源开关，打开盖子（具体见盖顶标签）；
3、确认排水阀关闭，注入加热用水（蒸馏水最佳）至加热器盖尖端的水位处渗出水来为止。
4、待灭菌物品放入灭菌提篮中，大提篮在下，小提篮在上；
5、关闭盖子；
6、在控制面板上设置相关参数：
1）按“设定/确认”键，使设定项目闪烁，即可调。每按一次，设定项目会移动；最后按下“设定/确认”键，将设定值的变更内容以及运转中的设定值显示在数字显示部分；
2）“预约”键：设定开始运转的日期；
3）“程序选择”键：用于从4个步骤（各三种程序）共12个存储项目中选择所需步骤；
4）“冷却风扇”键：用于选择排气时的冷却方法；
7、按“开始”键开始运转与预约；
8、设定时间结束后自动停止，若中间需停止按“停止”键。
二、注意事项：
1、必须使用本产品附带的排气箱，将箱内软管插入排气箱的深处插孔中，防止在运行中因蒸汽泄漏而导致烫伤。
2、左右旋转排气箱密封垫圈，使其确实拧到底。如果向同一方向旋转，排气软管会弯曲而导致故障。
3、切勿使被灭菌物品堵塞灭菌处理室内的开孔部和温度传感器，也不要对温度传感器世家压力。
4、灭菌处理室内温度60℃及以上时，无法打开灭菌锅盖，需待温度降到60℃一下。
5、打开盖子时，切勿将脸靠近灭菌器。
3. 超低温冰箱
型号：MDF-U3386S
产地：日本
成产厂家：Panasonic公司
价格：
购置日期：
超低温冰箱使用说明及注意事项
一、操作步骤：
1、在空箱情况下，将电源线连接到合适规格的专用插座，并且打开电源开关；
2、检查电池开关是否为ON；
3、若听到报警声则按下蜂鸣器停止键（BUZZER）来停止鸣叫；
4、设定所需要的箱内温度：
打开电源开关---按下SET键---用数位移动键和数值增加键设定数值（勿长按），如-75℃---按下SET键
5、检查箱内是否达到所需的温度；
6、按下报警测试键（ALARM TEST）来确认报警指示灯是否会点亮以及蜂鸣器是否会鸣叫；
7、在确认以上步骤后，可以把少量的物品放到低温箱内以防温度上升。
二、注意事项：
1、电池检查灯（BATTERY）：该灯亮时表明需更换电池；该灯闪烁时表明需换风扇电机（需更换时联系售后）。
2、报警情况下，报警指示灯（ALARM）闪烁。
3、过滤网检查灯（FILTER）亮，则需清洗过滤网。取过滤网时勿接触冷凝器，以免烫伤。
4、长按数位移动键和数值增加键5秒以上，则进入键锁定状态。
5、设置模式中90秒内没有再按键，则自动返回温度显示状态。
6、每月清理箱体、冷凝器过滤网一次，每月除霜一次，以保证冰箱正常运行。
4. 超纯水仪
型号：NW15VF
产地：中国香港
成产厂家：Heal Force公司
价格：
购置日期：
超纯水仪使用说明及注意事项
一、操作步骤：
1、插好电源，打开开关（位于机身后方）；
2、仪器启动，自动进行反洗膜程序，时长3分钟。反洗后水由黑色管子流出，事先将其伸至水池；
3、若需要去离子水，按下RO键或直接从纯水桶中接取；
4、若需要超纯水，按下UP键。
5、取水结束后，按STOP键结束制水。
6、关闭仪器开关，整理好物品。
二、注意事项：
1、经常关注自来水的水质，若水质很差时，请及时停机。
2、如遇断水，及时停机。
3、如需停机一段时间，首先清洗超纯水系统，然后再关闭进水阀和机器电源。
4、定期对多功能水箱进行消毒和清洗。
5、定期更换耗材。
5. 变性梯度凝胶电泳系统
组成：VS20WAVE-DGGE电泳系统、MU-D01数字蠕动泵、CS-500V电源
产地：英国
成产厂家：环亚生物科技有限公司
价格：
购置日期：
变性梯度凝胶电泳系统使用说明及注意事项
一、操作步骤：
1、制胶
1）将硅胶管细端连接到梯度混合器出口，粗管穿过蠕动泵，连上针头（1mL）固定在胶板上部中央。胶板固定在制胶底座上。
2）将梯度混合器放到磁力搅拌器上面，变性剂管内放入转子，关闭梯度混合器的阀门（竖立）。
3）向梯度混合器的两个分开试管内各加低浓度和高浓度的变性剂。每5ml高浓度变性剂里面加100ul梯度凝胶指示剂，同时添加体积分数为0.09%过硫酸铵和TEMED到两个浓度的变性剂中，混匀，在聚合前允许的时间不超过10min。
5）向储存室B加入低浓度的变性剂，打开开关，让其填充到阀门管道内。此过程要快速，不要让变性剂进入混合室A。将高浓度的变性剂加到混合室A。
6）打开磁力搅拌器
7）打开蠕动泵，蠕动泵流速5ml/min（10转）。同时打开梯度混合器混合室的阀门。
8）当混合室A内没有液体前，关闭蠕动泵。
9）插好梳子，等待胶凝固。
2、拔下梳子，依次加样
3、电泳
1）检查水箱，干净、无杂质。
2）注入4升左右蒸馏水，确保水位淹没过浮控开关。
3. 打开电源开关，启动机器。
4. 按S键，显示屏开始闪烁，表示温度可被设定。
5. 按旋转调控钮，设置温度。
6. 温度设定后，再次按S键，数据将被记录，并开始运行。显示器开始显示水浴的实时温度，直至到达设定温度。
7.实验结束，关掉电源。
二、注意事项：
1. 灌制凝胶过程性要慢，避免出现气泡，因为气泡会影响聚合。
2. 不得注入自来水等含有金属离子杂质未经纯化过的水，这些杂质的存在会腐蚀不锈钢材料，影响仪器的使用效果以及寿命。水的纯度越高，电阻越大。尽可能选择纯度高的水作为控温流体。
3. 对于循环水，如果短期内连续使用，可一个星期更换一次蒸馏水。如果短期内不再使用，须将循环水去除。
6. 荧光定量PCR仪
型号：7500Fast
产地：美国
成产厂家：Applied Biosystems公司
价格：
购置日期：
荧光定量PCR仪使用说明及注意事项
一、操作步骤：
1、启动电脑，等待WinXP桌面完全显示后打开7500Fast主机电源；
2、等待7500Fast主机“Power”指示灯稳定后，打开SDS软件；
3、创建绝对定量反应板文件：
1）选择Create New Document；
2）从Assay 下拉列表中选择Absolute Quantification，然后单击Next；
3）选择（或创建）所需探针加入到反应板文件中，单击Next；
4）为每个反应孔指定探针和任务，为标准品赋值，单击Finish；
4、选择Setup选项卡，选中样品对应的反应孔，在Well Inspector窗口中输入样品名，并检查探针和任务设置；
5、选择Instrument选项卡，设定PCR条件、反应体系；
6、选择File ---Save as，保存反应板文件为***.sds；
7、放入预先配置好的PCR反应管（包括样品、定量标准及空白）单击Start开始反映程序，等待软件倒计时软件开始后再离开；
8、运行结束后，选择Result选项卡---Amplification plot 选项卡，选择Auto Ct分析方法，点击Analysis---Analyze进行分析，选择Report选项卡查看结果；
9、选择File--Export，导出所需结果；
10、关闭SDS软件，关闭7500Fast主机，再关电脑。
二、注意事项：
1、该仪器需半年校正一次。
2、不要在PCR管盖或侧壁上做任何标记，防止影响透光率或污染仪器。
3、仪器运行时，千万不要将PCR仪的盖子强行打开，以免损坏仪器。
4、灯泡若损坏，拔掉电源冷却15min后，换备用灯泡。
5、为防止过热现象发生，一定要经常检查灰尘累积情况，且每月清理一次。
6、清洁内孔时，用棉棒蘸水后，在孔内轻轻旋转，必要时酒精擦拭。
7. 生物安全柜
型号：1300 SERIES A2
产地：美国
成产厂家：Thermo科技公司
价格：
购置日期：
生物安全柜使用说明及注意事项
一、操作步骤：
1、插好电源，打开开关。
2、按“ON”键2秒，开启生物安全柜。
3、双手水平托起玻璃门至指定位置，托起过程仪器会自动发出报警声，到达指定位置后，报警声停。
4、待指示灯全部变绿后，仪器可正常使用。
5、按日光灯图标键，日光灯亮。
6、工作台中操作完成后，整理好个人物品，用酒精棉将台面擦拭干净。
7、双手拉下玻璃门至指定位置，风机指示灯变红，打开紫外灯“UV”，固定时间为1h。
8、长按“ON”键5秒，关闭生物安全柜。
二、注意事项：
1、托起玻璃门时，双手一定要保持水平，若产生报警声，则表示玻璃门位置偏差。
2、打开玻璃门后，紫外灯自动关闭。
3、定期清理玻璃门与工作台面底部空间。
8. CO2培养箱
型号：371
产地：美国
成产厂家：Thermo科技公司
价格：
购置日期：
CO2培养箱使用说明及注意事项
一、操作步骤：
设定
1． 控制温度设定。按Mode键至Set档，按左键或右键选择至显示“TEMP XX . X ℃”，用上键或下键输入数值（如 37 ℃），然后按Enter键确认。
2． 过温保护温度设定。按Mode键至Set档，按左键或右键选择至显示“OTEMP XX . X ℃”，用上键或下键输入数值（如 38 ℃），按Enter确认。
3． CO2浓度值设定。按Mode键至Set档，按左键或右键选择至显示“CO2 XX . X %”，用上键或下键输入数值（如 5.0%），然后按Enter确认。
校正
1． 温度的校正。（若怀疑温度显示值不准，可用标准温度计放入箱内，充分稳定后，隔着玻璃门读数，若与显示值不同，可进行校正。）按Mode键至Cal档，按左键或右键选择至显示“TEMP CAL XX . X ”，用上键或下键输入实际测量值，然后按Enter键确认。
2． CO2浓度值的校正。（一般以空气为标准来校零，每半年进行一次。）
方法：a. 把CO2浓度设定值设为零（目的是不让钢瓶中CO2进入箱内）。
b. 打开所有的门5分钟，往水盆内加上水，关上所有的门，稳定12小时以上。
c. 等温湿度充分稳定后，观察CO2浓度显示值是否为零，若不为零，校正至零。（按Mode键至Cal档，按左键或右键选择至显示“CO2 CAL XX . X”，用上键或下键把数值调为零，然后按Enter键确认。）
d. 重新把CO2浓度设定值设回（如5.0 %）。
高温消毒
1．按下培养箱显示面板右侧的绿色按钮约3秒钟，直到绿灯亮。
2．屏幕提示“REMOVE HEPA”，“REMOVE WATER”和“PRESS ENTER”，打开培养箱取出不耐高温的高效过滤器、两个过滤膜套件和水，然后在提示后1分钟内按下ENTER键，高温消毒开始自动进行。
3．机器逐渐加热至140 ℃稳定2小时，然后降温至设定温度，整个过程约12小时。
4．屏幕提示“CYC COMPLETE”，“REPLACE HEPA”和“PRESS ENTER”，打开培养箱放回高效过滤器、两个过滤膜套件和水，然后按下ENTER键，高温消毒结束。
5．每次高温消毒后，必须进行一次CO2浓度校零。
二、注意事项
1．减压伐调整压力时要憋住管子调整，并且不能超过0.1MPA。
2．培氧箱在使用时，水盘内不能缺水（需用蒸馏水或超滤水）,每周换一次，每次加满水盘的２／３。
3．培养箱的风机要防潮。如果一两天不用，就不用关机了，如果长时间不用应倒干水盘里的水，并保持37 ℃加热几小时，排干里面的湿气，再关机。
9. 倒置显微镜
型号：T1-SNCP
产地：日本
成产厂家：Nikon公司
价格：
购置日期：
倒置显微镜使用说明及注意事项
一、操作步骤：
1、将灯光调至最弱后，打开显微镜开关。
2、调至BINO档，可在显微镜下观察实验材料。
3、开启电脑，双击Capture快捷方式，并调至PHOTO档，即可在电脑上显示显微镜中的视野。
4、保存后图片将存入TEMP快捷方式，双击后查看。
5、将灯光调至最弱后，关闭显微镜开关。
二、注意事项：
1、每次用完显微镜后，将载物台清理干净，并罩上防尘罩。
2、每次在打开与关闭显微镜开关时，务必保证灯光处于最暗状态。
10. 低温高速离心机
型号：Allegra X-30
产地：美国
成产厂家：BECKMAN公司
价格：
购置日期：
低温离心机使用说明及注意事项
一、操作步骤：
1、插好电源，打开开关（机体左侧）；
2、按OPEN键打开机盖；
3、选择合适转子，用T型扳手旋紧转子。取下转子保护卡板，将离心管对称放入转孔，旋紧各自卡板（0685转子需用T型扳手旋紧）；
4、用力按下机盖前部两侧，听到“咔哒”声为锁住机盖；
5、调节所需参数：
1）按下ROTOR(转子)键，按上下光标键，直至出现要使用的转子编号（301.5转子或0685转子），ENTER键确认；
2）选择转速“RCF(XG)”或“RPM”，灯亮即为选中；按上下光标键，直至出现需要的转速或离心力；（301.5转子最大转速为16000RPM或29756RCF；0685转子最大转速为10000RPM或10864RCF）
3）选择TIME键调整离心时间。最高可设定9h59min，离心剩余时间将在显示屏上显示；
4）选择TEMP键设定运行温度，温度范围为-20℃~40℃。离心前可将转子预热或预冷；
5）ACCEL与DECEL键设置离心得加速度与减速度，一般设为默认值9；
6、参数调整结束后，按下START键启动，设定时间结束后离心自动停止；若中间需停止，按下STOP键，离心以设定减速度减速；按住STOP键超过1S，离心以最大减速度减速；
7、运行过程中可更改相关参数，需按ENTER键进行确认。
8、“PLUSE”键：瞬时离心，长按此键离心速度逐渐加快，松开后离心结束；
9、当转子停止转动，OPEN 灯亮，按OPEN键打开盖子，取出离心物品。
10、取下转子，用吸水纸将侧壁擦拭干净。
三、注意事项：
1、样品必须严格配平后对称离心，若IMBALANCE指示灯闪烁，表明未配平或保护卡板未拧好，此时应立即按“STOP”键停止离心。
2、301.5转子可离心1.5ml与2ml离心管，套管为ml规格；0685转子可放85ml离心管，套管有50ml与15ml规格
3、按规定操作并做好使用记录，如有问题请及时向管理人员提出或及时补救。
